(미생물학실험)미생물 생균수 측정 Report 자료
(미생물학실험)미생물 생균수 측정 Report
순수세균 배양에 있어서 “얼마나 많은 미생물이 존재하는가?”하는 물음에 대답하는 것은 비교적 쉬운 문제이다. 그러나 미생물의 군집이 혼합되어 있는 환경시료의 경우에는 문제가 대단히 복잡하여 간단하고 확정적인 대답을 할 수가 없다. 계수는 할 수 있으나 얻어진 수치는 사용된 기법에 따라 평가되어야 한다. 계수법은 신중하게 선정되어 얻어진 결과가 해답을 얻고자
◉실험 제목 : [ 미생물 수 측정 ]
◉실험 목적
◉실험원리
◉시약 및 기구
◉실험 방법
◉실험 결과
◉고찰
◉토의
①직접계수법
미생물은 현미경에 의한 직접 관찰에 의해 계수될 수 있다. 이 방법은 가장 높은 수치가 되며 가끔 생체량의 간접적 계산을 위해서도 사용된다. 그러나 이 방법에는 몇가지 단점이 있는데 산 미생물과 죽은 미생물을 구분할 수가 없다는 점, 많은 잔사물을 포함한 시료에 있어서는 미생물의 수가 실제보다 낮게 계수되며, 미생물을 계수하고 난 후에 계속적인 연구를 할 수 없는 점 등이 그것이다.
원생동물이나 조류, 균류 등 비교적 큰 미생물은 계수실을 이용하여 쉽게 직접계수가 가능하다. 혈구계수실, Petroff-Hauser챔버등과 같이 일정한 용량을 담는 여러 가지 유형의 계수실이 개발되어 있으며 세포수를 셀 때 사용할 수도 있다.
?실험 제목 : [ 미생물 수 측정 ]
?실험 목적 : 검체를 희석수로 희석한 후 일정량의 희석 검액을 평판 배 지위에 골고루 편 후 배양하여 나타난 집락의 수를 셈함으 로서 윈래의 검체속에 균집락 형성능을 측정하는 조작을
익힌다.
?실험 원리
◎ 표면 평판법(Surface plating)
여러 종의 미생물이 혼합되어 있는 시료나 배양액에서 도말 평판법과 주입 평판법을 통해 분리된 단일 콜로니는 몇 번의 계대배양을 통해 순수한 단일 콜로니(Single Colony)로 분리될 수 있다. Surface plate는 순수 분리에 사용되는 쉽고 간단한 방법이다. 이 방법의 기본 원리는 한천 평판배지에 소량의 시료를 넓게 펴서 세균의 밀도를 낮춰(희석, Dilution) 단일 콜로니를 얻는 것이다.
◆ 주입 평판법(pour plating)과 Surface plating를 평판계수법이라 한다. 표면평판법은 뜨거운 한천배지에 의해 손상 받을 수 있는 열 감수성 미생물의 측정에 적합하며, 절대호기성균( obligate aerobes)은 한천배지 표면에서 빨리 자라서 큰 집락을 생성한다. 이 방법에서 중요한 것은 시료를 적절히 희석하여 형성되는 집락수가 적당해야 한다는 점이다. 실제로 통계적으로 가장 유효한 집락의 수는 평판당 25～250개 사이이다.
생균수 측정으로 얻어지는 집락의 수는 접종량(inoculum size)뿐만 아니라, 사용되는 배지의 적합성과 배양조건 등이 영향을 미친다. 또한 2개 이상의 균이 뭉쳐서 하나의 집락을 형성한다면 실제 균수보다 적게 측정된다. 이러한 이유로 생균수의 측정은 생균수(viable cell count)라기보다는 집락형성 단위(colony-forming unit, cfu/㎖ 혹은 cfu/g)로서 표현된다.
이 방법은 여러 가지 어려운 점도 있지만, 생균수의 측정방법으로 가장 좋은 방법이며 폭넓게 사용되고 있다. 이 방법은 균수가 적은 시료에서도 측정이 가능하여 원료나 제품의 미생물학적 오염을 감지할 수 있다. 더욱이 혼합 균주배양액 또는 오염된 시료로부터 특정한 균의 수를 선별배지(selective media)를 사용하여 측정할 수도 있다.
?시약 및 기구
Auto clave, Incubator, 알콜 램프, 호일, 알콜, 유산지, 비커, 메스실린더, 랩, 면전, 삼각플라스크, 시험관, 액체 배지에 배양시킨 균, Nutrient Agar(N.A.), 피펫, petri dish
?실험 방법
① 시험관 8개에 각각 9ml씩 증류수를 넣어 auto clave에 멸균한다.
② petri dish 6개를 auto clave에 멸균한다.
③ Nutrient agar(2.76g/120ml) 제조하여 auto clave에 멸균한다.
④ pipet을 이용하여 세균 희석액을 1㎖씩 취하여 10¹부터 10?까지
희석액을 시험관속 멸균한 증류수에 넣어 제조한다.
⑤ 배지에 희석한 균을 각각 0.1㎖씩 떨어뜨린다.
⑥ 알코올 에 담가두었던 hocky stick을 화염 살균한다.
⑦ hocky stick을 plate 한쪽에서 식힌 후 plate에 주입했던 세균 배양액을 hockey stick으로 분산 도말한다.
⑧ 배지가 굳으면 35℃에서 24시간 배양 후, 30~300개 사이 것을 개수를 세어 기록한다.
(원액)
↓ ↓ ↓ ↓ ↓ ↓
0.2ml 0.2ml 0.2ml 0.2ml 0.2ml 0.2ml
※ colony 수 〓 50
희석배수 〓
plate에 옮긴양 〓 〓 0.2ml
〓]50××5 〓 × cell/ml
8. 실험 결
자료출처 : https://www.ALLReport.co.kr/search/Detail.asp?xid=a&kid=b&pk=11055780&sid=leesk55&key=
[문서정보]
문서분량 : 18 Page
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자료제목 : (미생물학실험)미생물 생균수 측정 Report
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키워드 : 미생물학실험,미생물,생균수,측정,Report
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